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水产养殖提问285(不断更新)再聊一下养殖户扩培乳酸菌液的问题

2019-05-29 09:03:51   文章来源:强微生物科技   浏览次数:816
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水产养殖知识看这里:http://www./Technicalservice.asp?borderid=13

1、钟老师,你好!我是强微产品的忠实用户,前几天在官网上看到有养殖户提问(水产养殖提问93)用MRS培养基扩培强微乳酸菌的问题。自己再网上购买了MRS培养基的材料,进行少量扩培,并和用水产苷+红糖扩培的进行比较,有些困惑想请老师解答。

     扩培过程如下:
     5月25日20:00开始扩培,用的是5L的密封塑料桶,桶1用的是MRS培养基,桶2用的是水产苷+红糖作为培养基,菌粉都是壮肠100,温度在30-35之间.
     5月26日10:00开瓶测试PH值,桶1是5.3,桶1内有大量气体,感觉要把瓶盖顶起来了,打开瓶盖时有大量泡沫溢出;桶2PH为4.1,瓶内气体较1桶要少些。
     5月27日7:00桶1ph5.3,桶2ph值4;
     5月28日8:00桶1ph5.3,桶2ph3.6;
请问钟老师:1.按照咱普通养殖户判断乳酸菌是否扩培好的标准主要是看PH,味道,是否说明桶1扩培失败呢?(因为目前没有显微镜也无法在显微镜下观察)为什么用营养丰富的培养基扩培的反而要差些?(所购买的培养基成分都是比较贵的纯度AR的,应该不会有假)
       2.扩培期间瓶内或桶内的气体是否要放出?如果不放出会不会把瓶撑爆?但是放出气体后会不会有杂菌混入导致扩培失败?
      3.您在回答上个养殖户提的问题时说过“ 四是流加小苏打溶液,原理是乳酸菌发酵产酸,而PH达到5以下后,会慢慢抑制乳酸菌自己的繁殖,Ph达到4以下时,几乎可以完全抑制乳酸菌繁殖,所以,您必须在发酵12小时后,或每12小时左右,流加一次小苏打粉,添加量为发酵液量的0.3%左右,或自己用PH计检测一下PH,提高PH到5.5以上。”我的桶1PH扩培12小时后就一直在5.3左右,是不是说明菌还在繁殖需要继续等待呢?
希望钟老师百忙之中帮忙回答下,谢谢!

  您好,MRS培养基是能培养绝大多数乳酸菌的培养基,并主要是指在厌氧培养状态下对乳酸菌有一定的选择性,这个培养基中氮源是非常丰富的,氮源营养中的蛋白胨、牛肉膏和酵母膏等用量达到2%之多,而作为碳源的葡萄糖等用量也仅仅是2%,所以,它是侧重于繁殖生长,但必须灭菌处理,因为氮源太丰富,养殖户用可能会造成杂菌多,在我的水产养殖提问93中,我确实缺乏仔细思考这个问题,确实只是顺口一说,非常抱歉,现在看了您的提问,我仔细考虑了一下,它确实不太适合养殖户朋友扩培;
    养殖户建议用红糖5-7%和强微水产苷0.5%来扩培,例如壮肠QW100(育苗专用菌)250克,红糖20公斤,强微水产苷1.5公斤,水300公斤左右,我们推荐给养殖户的水产苷用量只是250克,但也是为了成本考虑,养殖户也没有必要用那么高的水产苷,只加250克的水产苷作为氮源和细菌生长因子源,也是足够培养出至少1亿/毫升的含菌,且PH下降得快,可以有效抑制杂菌的生长(低PH首先抑制其他杂菌),一亩泼洒5公斤以上也是足够作为平时维护池塘水体乳酸菌用的了,如果泼洒20-40公斤/亩,则可以完全抑制池塘水中的弧菌用的了;很显然,您的目的是想扩培出相对专业的“乳酸菌扩培液”产品,这样建议您用水产苷多一些,多增加一些氮源,即以上推荐的配方,比MRS培养基的碳氮比要高出5倍以上,这有利于不灭菌的粗放扩培,并且建议您充气培养,不要紧的,只需要每500公斤一个曝气头充气培养24-48小时,最好48小时,里面至少有乳酸菌5-15亿/毫升左右,培养的效率要高得多,碳源是能量保证繁殖和代谢所需要的能量和构成细胞的碳骨架,氮源则成为提高活菌含量的限制性因子,但对养殖户来说,又不能用太多的氮源,以免杂菌多,对养殖户来说,还是要有一定的碳氮比高度,要比较高的碳氮比,这样可以有较大一部分碳源转化成乳酸有机酸,来降低PH值,保证乳酸菌的纯净,防止杂菌等;
   这就比较好解释您的发酵出来的现象了,用MRS培养的PH的下降是有限的,因为它形成乳酸有机酸的碳源有限,您的试验也有可能污染了杂菌,您可以通过闻气味来初步判断一下,酸香味是正常的,如果有不愉快的气味,则可能有杂菌,最好是用显微镜观察一下,我们的壮肠QW100(育苗专用菌)主要以粪肠球菌(乳酸菌的一种)为主,观察是球形菌,成双成对的比较多;
   而您用红糖+水产苷的试验中,估计您的水产苷也只用250克吧,这个对普通养殖户来说是足够了,PH会下降得比较快,您也看到了,PH在14小时就降到了4.1,在35小时时为4,在58小时时降到了3.6;而用MRS培养基的从14小时后一直是5.3(可能杂菌也比较多了);
   普通的养殖户判断乳酸菌扩培是否成功,一是看PH,降到4.4以下就算是比较好的了,也是比较纯净的了,杂菌也不会过多;二是闻气味,是一种酸香味的,比较愉快的气味,但凡不愉快的异味,都是有杂菌,当然,有一些是因为时间太长,乳酸菌自溶死亡后产生的臭味,也是正常的,如果一直没有用完,保存的时间比较久,如1个月以上,有臭味了但PH在4左右或以下的,也是正常的可以用的,可以泼洒的,只是乳酸菌死亡自溶的气味,仍然有一定的活菌,但活菌估计不到0.1亿/毫升,仍然可以用,代谢产物和乳酸菌自溶产物,也是藻类的营养,也可给水体提供菌相营养;
    发酵产生的气体可让它自然挥发掉,您不要密封太死,如果是带盖子的,旋盖的就要留一圈不要旋死,如果是用塑料膜扎的,则自然可以走气的,不用管它;发酵容器中一直是保持正压状态,杂菌进不了的;
    流加小苏打粉或烧碱液,那是专业乳酸菌生产厂家在专业化发酵罐上的技术,不太适合养殖户,因为养殖户如果流加小苏打,不断中和发酵产生的有机酸,提高PH,以促进乳酸菌繁殖,则杂菌是喜欢高PH值的,则可能就会大量污染杂菌了,所以,不建议流加小苏打粉;除非您是扩培24-48小时后,并控制在3-5天内就全部泼洒到池塘中,不保存,及时的用完到池塘中,则就可以采用;
    您的最后一个问题,采用MRS培养基的PH一直在5.3,并不意味着一直在繁殖,或许可能是杂菌多了,杂菌可能产碱,保持PH不下降,毕竟营养这么丰富的培养基,杂菌也喜欢,特别是我们养殖户是不灭菌培养的,所以,目前无法判断您的MRS培养是否成功,但如前所述,您可以闻气味,现在才58小时,如果气味异常或难闻,肯定是有杂菌,就失败了不能用了;
    最后说一句,建议您充气扩培,充气时间最多48小时,PH也会下降到4.5以下,杂菌很少,然后要么马上泼洒到池塘中,要么就是密封好保存,并最好在10天以内用完到池塘中去,因为充气培养是最有效的繁殖方法,大量繁殖的结果是迅速消耗了糖份和营养,所以,保存期减少到10天以内要用完,而不充气培养的可以最多保存30天用完,因为不充气培养的,其中的营养是慢慢消耗的,保存时间会长一些;
    乳酸菌是兼性厌氧菌,在有氧条件下是大量繁殖,在无氧条件下是缓慢繁殖,有氧或无氧条件下的不同,是对能量(葡萄糖)利用效率的不同,有氧条件下是通过氧化磷酸化进程获得能量ATP,所以,繁殖效率非常高非常快,工业化生产粪肠球菌也是充气培养的,无氧条件下适合于养殖户用来扩培乳酸菌,一是有害细菌不喜欢厌氧条件,二是厌氧产酸多PH下降快,也是可以选择性抑制有害细菌的,所以,无氧或厌氧培养是养殖户的普遍采用的方法,毕竟养殖户不可能灭菌培养的;当然,如前所述,您也可以充气扩培,只是要控制充气的时间24-48小时内,并及时用完,也是杂菌可控的;
    养殖户“乳酸菌扩培液”的制作看这里:http://www./show.asp?newsid=6174;专业一点的则建议水产苷用量达到1.5公斤并建议充气培养,可以培养出比文章中推荐的250克水产苷添加量的,要大5倍多的乳酸菌活菌含量;


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